3D 支架细胞接种规程

　　适用范围

　　建议根据此操作规程进行 3D 支架(包装在未经细胞培养表面处理的细胞培养板)的细胞接种。

　　材料与设备

　　无菌细胞培养板(未经细胞培养表面处理)

　　无菌镊子

　　移液器

　　无菌移液器吸头

　　真空吸液泵

　　细胞培养超净台

　　细胞培养恒温箱

　　步骤

　　1.将欲培养的细胞重新悬浮到细胞培养液中以得到所需浓度。

　　2. 在细胞培养超净台内， 用移液器在每一个 3D 支架的上面缓慢加入正确容量参考下表)的细胞悬液，覆盖约 80-90%的支架表面。注意：不要让细胞悬液接触培养板孔壁，这会导致细胞接种效率降低

　　3.小心的将培养板转移至恒温箱内。避免晃动细胞培养板!

　　3. 培养 3 小时后，将装有支架的培养板从恒温箱中移出。在细胞培养超净台内向培养板的每一个孔中加入适当容量(参见下表)的新鲜培养液。确保支架被完全浸没并沉在孔的底部。然后将培养板放回到恒温箱中。

　　5. 培养 24 小时后，将支架周围的细胞培养液小心吸去，然后用无菌镊子将支架移入到新的细胞培养板孔中。在每个新孔中加入新鲜的培养液。再次检查并确保支架沉在孔的底部。继续进行正常的细胞培养直到需要进行分析检测为止。