您目前在二维细胞培养中所使用的任何细胞方法都可以用于洗脱在 3D 支架上培养的细胞培养于瑞康健的 PCL 和 PS 支架上的细胞会分泌大量的细胞外基质(ECM)，这可能会导致您的操作规程做出相应的更改。下面是我们已经的一些建议来帮助您增加细胞洗脱产量。

　　1. 移去细胞培养液。

　　2. 用 PBS 漂洗支架 2 遍。

　　3. 开始时，我们建议您尝试下面的酶溶液。你也许需要调整酶的浓度。

　　- 胰酶(加或不加 EDTA)溶液

　　- 胶原酶溶液

　　- 胰岛素(加或不加 EDTA)和胶原酶混合溶液

　　4. 将支架完全浸没于您使用的酶溶液中。

　　5. 将装有支架的细胞培养板放入 37℃的恒温箱 10 到 30 分钟。请注意：在这段时间内用振荡器或摇床等对您的培养板进行晃动可以加速细胞分离!

　　6. 显微镜下观察细胞分离结果。

　　7. 细胞分离后，加入与原酶溶液同体积的细胞生长液。

　　8. 用用移液器将细胞悬液在支架内轻轻地来回冲洗 5 次，使得支架中残留的细胞可以被冲洗出来。

　　9. 将细胞以 1000 转/分钟旋转 3 分钟后分离， 重新悬浮到细胞培养液中。

　　10. 此细胞悬液可用于再接种或进行实验分析。

　　上述所有的酶已经被证实对从我们的三维支架上分离细胞是有效的。使用台盼蓝染色排除法，我们发现在三维支架上培养的细胞对酶的破坏有很强的抵抗力。在胰酶/EDTA 溶液处理后，二维平面培养时死细胞的数量(黑白着色)要明显高于三维培养时的的数量(图 1)。胰酶处理 30 分钟后，二维培养时就没有活细胞产出了(图 1)。